本文主要說明高效液相色譜儀的一般操作步驟。

1、過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。

2、對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10～20分鐘。

3、打開HPLC工作站（包括計算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。

4、進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動菜單。

5、有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時速度不要超過10mL/min。

6、調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。

7、設(shè)計走樣方法。點(diǎn)擊file，選取select usersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點(diǎn)擊new method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。

選完后，點(diǎn)擊protocol，一個完整的走樣方法需要包括：

a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2～5分鐘；

b.基線歸零；

c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；

d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

8、進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

9、關(guān)機(jī)時，先關(guān)計算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

10、填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

 在操作時要注意以下事項：

1、流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。

2、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。

3、所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。

4、壓力不能太大，最好不要超過2000psi。

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